葡萄籽多酚“原花青素”具有的抗氧化性能与对皮肤的功效

1. 序言

植生素植物来源的化学物质：植物营养素。这一词已经广为大家所熟知。植生素被列为3大营养素（碳水化合物、蛋白质、脂质），5大营养素（+矿物质、维生素），6大营养素（+食物纤维）之后的第7大营养素。由迄今为止的研究成果可知，植生素在生物体内功能调节方面起到了至关重要的作用。

多酚是植生素之一，它是几乎所有植物都具有的抗氧化功能物质的总称。多酚大多数作为苦味成分和色素蓄积于植物体内。化学上，因其分子内包含有多个酚羟基而被称作为多酚。植物为了保护自己免受氧和日光等的影响，尤其为了将遗传信息准确地传递给子孙后代，在与遗传相关的种子部分储备了大量抗氧化物质。

原花青素是葡萄籽中大量含有的多酚之一，在多酚中也属于抗氧化作用特别强的代表性物质。法国虽然是一个具有高脂肪饮食习惯的国家，但是法国的心脏病死亡率却显著低于其他欧美各国，这就是大家所知的法国悖论。关于这一点被发现与喝红葡萄酒有关，而且红葡萄酒当中的多酚已经被证实能够防止LDL胆固醇的氧化。在红葡萄酒的多酚类中，原花青素是其中的主要成分，它作为法国悖论的活性本体而备受瞩目。通过以亚油酸-β-胡萝卜素的水溶液系统中的氧化速度为指标实施的抗氧化试验，对其抗氧化性功能进行了研究后，证实葡萄籽多酚的抗氧化能力的强度远高于市面上的代表性天然抗氧化物质(图1)。

“Gravinol KPA-CU”是用精制水由葡萄籽中提取出多酚后，用乙醇配制而得到的，提高了纯度和透明度的提取物，具有高抗氧化能力的多酚“原花青素”为其主要成分 (图2)。众所周知，原花青素除了清除活性氧的能力、抗炎效果以外，还具有通过抑制酪氨酸酶活性来抑制黑色素形成，以及抑制黑色素细胞增殖的能力。并且最近的研究表明，它具有强抗糖化能力(抑制AGEs形成的活性)。

Gravinol KPA-CU一种物质就兼具抗氧化、抑制酪氨酸酶活性、抗糖化三种强力功效，它是一种来源于葡萄的安全化妆品原料，其对肌肤透明感、弹性的改善效果，也就是抗衰老效果是非常值得期待的。

已经有其在口服后对色素沉着的抑制作用与UV照射产生的色素沉着形成的抑制作用等皮肤学方面的报告。此次为了确认这种化妆品原料Gravinol KPA-CU在in vivo方面对于皮肤的功效，由公司内部志愿者进行了人体监测试验。结果发现它能够更加有效地起到对肌肤亮泽度的改善作用，因此下面对其进行报告。

2. Gravinol KPA-CU的功效

关于Gravinol KPA-CU的三大特点抗氧化、酪氨酸酶活性抑制、抗糖化作用介绍如下。

2-1. 抗氧化(抑制活性氧生成)

使用DPPH测定DPPH自由基清除活性，从而对其抗氧化作用进行了评价。

向配制成0.1%浓度的样品40μL中加入DPPH溶液，在室温下反应1小时后，用酶标仪测定了517nm下的吸光度。以溶解或稀释各个样品所使用的溶液作为空白，以样品添加区域的DPPH自由基添加组与未添加组之差为A，以空白添加区域的DPPH自由基添加组与未添加组之差为B。由下式计算出了DPPH自由基清除活性。

DPPH自由基清除活性(%)=｛1-(A/B)｝×100

众所周知，在体内过量产生的自由基等活性氧会成为引发皮肤色斑与皱纹、动脉硬化、糖尿病、癌症等许多衰老现象的诱因。活性氧也会因紫外线（太阳光）、吸烟、身体上躯体上的应激、药物化学物质和某种食物的摄入而产生。我们认为清除这种活性氧，将继而引发的众多衰老现象防患于未然，也就是作为早期的防范是非常重要的。

以DPPH为模型基质对自由基清除活性进行了测定，结果Gravinol KPA-CU在低剂量下就呈现出强效的自由基清除活性，与作为美白剂使用的化妆品原料相比较具有与其等效或更好的抗氧化作用 ( 图3 )。可以说，由于葡萄籽多酚中所含有的原花青素具有比维生素C、维生素E、儿茶素、没食子酸更强的抗氧化作用，因此以很少的添加量获得了有效的自由基清除活性。有望强力抑制机体内导致肌肤色素沉着、衰老的一系列反应的初期刺激。

2-2. 酪氨酸酶活性抑制

使用来源于蘑菇的酪氨酸酶测定酪氨酸酶活性抑制作用，并对其进行了评价。

向配制好的样品20μL中加入1/15M磷酸缓冲液100μL及40U/mL蘑菇来源的酪氨酸酶40μL来进行混合。添加2.5mM L-DOPA 50 μL反应15分钟后，采用酶标仪在490nm下测定了吸光度。以溶解或稀释各个样品所使用的溶液作为空白，以样品添加区域的L-DOPA添加组与未添加组的测定值之差为A，以空白添加区域的L-DOPA添加组与未添加组的测定值之差为B。由下式计算出酪氨酸的活性抑制作用。

酪氨酸活性抑制(%)=｛1-(A/B)｝x100

造成肌肤暗哑、色斑等色素沉着的原因是黑色素在角质细胞中的沉积，酪氨酸酶是该黑色素形成的关键性的酶。体内的氨基酸酪氨酸在酪氨酸酶的作用下发生酶促转化，经过DOPA，DOPAquinone，最终变成成熟的黑色素被排出或沉积。抑制酪氨酸酶的活性则可以显著抑制黑色素的形成，因此具有抑制酪氨酸酶活性作用的曲酸、鞣花酸、熊果苷等被作为美白物质广为使用。

Gravinol KPA-CU显示出对于酪氨酸酶具有浓度依赖性的抑制活性(图4)。众所周知随着原花青素聚合度的增加，抑制黑色素形成的活性也会增强，而来源于葡萄籽的多酚含有许多高聚合度的原花青素，可以认为Gravinol KPA-CU也具有显著的抑制酪氨酸酶活性的作用。

2-3. 抗糖化 ( 抑制AGEs形成活性 )

使用人血清白蛋白测定了对于AGEs形成的抑制活性，对其抗糖化作用进行了评价。

向配制成0.1%浓度的样品20 μL中加入0.1M PBS 500 μL及40 mg/mL人血清白蛋白20 μL、2M葡萄糖100 μL后混合。60℃条件下，孵育40小时后，将溶液200μL分注于微孔板上测定了荧光强度（激发波长370nm，荧光波长440nm）。采用蒸馏水作为对照。以样品添加区域的葡萄糖添加组与未添加组的测定值之差为A，以蒸馏水添加区域的葡萄糖添加组与未添加组的测定值之差为B，由下式计算出了AGEs形成抑制活性。

抑制AGEs形成活性(%)=｛1-(A/B)｝x100

AGEs为Advanced Glycation End Products的缩写，它是蛋白质在非酶促条件下被糖基化的产物。身体内AGEs逐渐蓄积则会以各种各样的衰老现象显现出来，而皮肤上则以暗哑、硬化这样的形式显现出来。如果在血管内蓄积则会造成动脉硬化，并且众所周知它也是糖尿病恶化的重要原因。抑制AGEs的形成对于防止衰老保持年轻是非常重要的。

AGEs的形成机制中，虽然经历了阿马道里重排、蛋白质的缩聚等复杂的过程，但已经明确通过在血清白蛋白与葡萄糖反应体系中添加低浓度的Gravinol KPA-CU就能够抑制AGEs形成反应。另外它比强调抗糖化的植物提取物与作为美白剂而被使用的化妆品原料显示出了明显的强抗糖化作用 (图5)。

很多美白物质的作用机制都是与抑制酪氨酸酶活性有关，因此也有些材料同时兼具抗氧化作用。除此之外，同时兼具抗糖化作用（抑制AGEs形成作用）的Gravinol KPA-CU可以说是一种独一无二的美白?抗衰老材料。这就是能够以1种材料通过多种途径达到美白效果的Gravinol KPA-CU的优点。

3. Gravinol KPA-CU的美白效果

Gravinol KPA-CU通过其主成分原花青素清除活性氧的能力和抑制酪氨酸酶活性的作用对黑色素形成的抑制，对色斑和色素沉着具有的改善作用值得期待。通过In vivo测定了对色素沉着的改善作用，对其美白效果进行了评价。

对11名已获得书面同意的20～50岁的健康男女受试者，分别于早晚，每天2次涂抹含有1% Gravinol KPA?CU的乳膏于前臂外侧部。对照组使用了不含有Gravinol KPA-CU的乳膏（安慰剂）。乳膏中除了Gravinol KPA-CU以外不含有其他美白成分和紫外线散射？吸收剂。采用色彩色差计CR-300 (KONICA MINOLTA株式会社) 测定了肌肤的亮泽度(L*值)。拍摄前臂部的照片时粘贴颜色样卡(CASMATCH，协和钟表工业株式会社)，为使试验前与试验后的皮肤色调一致而进行了补正。

含有1% Gravinol KPA-CU乳膏组与安慰剂组相比较，从涂抹4周后可见L*值开始升高，在8周后可见对于肌肤亮泽度的显著改善作用， 显示出p=0.085的显著性差异 (图6)。通过目测确认肌肤的色调后，可以确认到涂抹前与涂抹8周后，肤色色调明显变亮(图7)。

色斑在面部肌肤问题中也属一大烦恼。一般认为受到紫外线刺激而产生的活性氧是产生色斑的原因之一。葡萄籽多酚中所含有的原花青素的强抗氧化效果与清除活性氧的自由基清除活性被认为与其作用相关。另外，有报告称，改善色素沉着的机制除了抑制黑色素形成以外，还有抑制黑色素细胞的增殖7)，因此，黑色素量减少，皮肤的色调亮泽度就会提升。

今后，我们将展开关于原花青素聚合度的差异与人体色素沉着改善作用的相关性的讨论和研究。

4. 结语

Gravinol KPA-CU可以说是一种具有超凡能力的美白物质，它兼具抗氧化能力、抑制酪氨酸酶活性的能力以及抗糖化能力(抑制AGEs形成)，可以从多方面达到抗衰老效果。可以容易地添加到化妆水、精华、乳液、乳霜等中，而敝公司为了发挥其优异的性能，推荐添加量为0.1～1%。

它来源于具有长期食用经验的葡萄，是一种安全性高的化妆品原料，在日本国内外已经被使用了十多年。我们已经取得了符合医药部外品原料标准附录标准的使用先例，也可以添加到医药部外品当中。略带红色的褐色透明液体处方时因其植物原料特有的色泽而受到好评。

今后我们仍将进一步获取功能性和有效性相关的数据，开展用途开发的研究，期待其被应用于新的化妆品中。

作者介绍:

龟甲万百欧凯米发（KIKKOMAN Biochemifa）株式会社企划开发部鸭川技术开发组邮编296-0004千叶县鸭川市贝渚1600松井圭子：筑波大学大学院修士课程Biosystem研究科结业，株式会社纪文Foodchemifa (现龟甲万百欧凯米发株式会社)入职，现就职于企划开发部鸭川技术开发组组长。

原千晶：横滨国立大学大学院环境情报学府结业，龟甲万百欧凯米发（KIKKOMAN Biochemifa）株式会社入职，现就职于龟甲万株式会社研究开发本部。

渡边 ：山形大学理工学研究科物质生命科学专攻博士前期课程结业，株式会社纪文Foodchemifa (现龟甲万百欧凯米发株式会社) 入职。现就职于企划开发部鸭川技术开发组。