葡萄籽多酚物质原花青素对肌肤抗衰老的作用及透明感的提升

1. 前言

近年来，植生素（植物由来的化学成分，又称植物营养素）的概念广为人知，被认为是继碳水化合物、蛋白质、脂肪（以上为三大营养素）、矿物质、维生素（以上为五大营养素）和食物纤维（第六大营养素）之后的第七大营养素。多项研究成果显示植生素在生命体内担任重要的机能调节作用。

多酚类物质也是一种植生素。绝大多数植物内都含有多酚，它具有抗氧化的功能，在植物内通常作为苦涩成分或色素而蓄积。由于其化学结构中含有多个苯酚羟基，因此而得名。植物为了保护自身不受氧化和光照的伤害，特别是能够正确的把遗传信息传递给后代，因此在遗传信息尤为集中的种子部分里含有大量的抗氧化物质。

法国虽是一个有着高脂肪饮食习惯的国家，但事实上法国人的心脏病死亡率远低于其他欧美各国，这一现象有个为人熟知的名字，叫做“法国悖论”。后来人们发现这一现象与喝红酒有关，进而经确认红酒中的多酚可防止LDL胆固醇氧化。在红酒中的多酚类之中，原花青素是其中的主角，它作为法国悖论的活性之本而受到人们的关注。

2. 葡萄籽多酚“原花青素”

“Gravinol KPA-CU”是一种用精制水从葡萄籽提取多酚，用乙醇调制得到的高纯度、高透明度提取物，其主要成分“原花青素”是具有高抗氧化功效的多酚。原花青素除了具有消除活性氧和抗炎症功效之外，它通过抑制酪氨酸酶活性来抑制黑色素生成和抑制黑色素细胞繁殖的能力也已为人所知。Gravinol KPA-CU还具有强大的抗糖化功效，有望帮助肌肤抗衰老和提升透明感。

Gravinol KPA-CU 集抗氧化、抑制酪氨酸酶活性和抗糖化三大功效于一身，是一种葡萄源安全化妆品原料（图1）。

图1. Gravinol KPA-CU 的特点

原花青素是葡萄籽中大量含有的一种多酚类物质，也是多酚类中具有特别强力抗氧化能力的一种代表性成分。图2 为原花青素及其他抗氧化物质的抗氧化能力的比较。

图2. 抗氧化能力的比较

3. 抗糖化、抗氧化、抑制酪氨酸酶活性

在女性的肌肤问题之中，“黄褐斑、雀斑”是二大困扰，而受紫外线刺激而产生的活性氧被认为是造成这种问题的一个原因。利用KPACU的抗氧化力和抑制酪氨酸酶活性的功效，对黄褐斑和雀斑有望获得预防和淡化的效果，进而通过它强大的抗糖化力，有望改善肌肤透明感和弹性，也就是抗衰老效果。

3.1. 抗糖化（抗AGEs 生成活性）

使用人血清白蛋白，对抗AGEs生成活性进行了评价（图3）。

图3. 抗糖化（抗AGEs 生成活性）

【试验方法】

将样品20 μL 与0.1 M PBS 500 μL、40 mg/mL 人血清白蛋白20 μL、2 M 葡萄糖100 μL 混合在一起，在60℃条件下培养40 小时，然后将溶液200 μL 滴定在多孔板上，在激发波长370 nm、荧光波长440 nm 下进行了荧光测定。对照组使用蒸馏水。设定样品添加区中的葡萄糖添加组和非添加组的测定值之差为A，蒸馏水添加区中的葡萄糖添加组和非添加组的测定值之差为B，按下式计算得到了抗AGEs生成活性。

抗AGEs 生成活性(%)={1-(A/B)}×100

【考察】

AGEs 为Advanced Glycation End-products 的缩写，是蛋白质被糖化后的不可还原的产物。人体内AGEs 聚集增多老化现象就会变得明显，表现在皮肤上的就是暗淡或硬化。在血管内聚集则会导致动脉硬化，也是糖尿病恶化的主要原因。防止AGEs 的生成，是防止老化保持青春活力的关键。

AGEs的生成需要通过阿马道里重排反应及蛋白质的缩合聚合等一系列复杂的过程。我们发现通过在人血清白蛋白及葡萄糖的反应体系里添加0.05%的Gravinol KPA-CU可以抑制AGEs的生成反应。

绝大多数美白原料的作用机理都是有关酪氨酸酶活性的，也有一些同时具有抗氧化能力。但在此基础上更具有抗糖化（抗AGEs生成活性）效果的Gravinol KPA-CU则可以称之为无与伦比的美白及抗衰老原料。同一原料可从不同方面同时达到美白效果，可以说是Gravinol KPA-CU的一大优势。

3.2. 抑制活性氧生成

使用DPPH，对去除DPPH 基团活性进行了评价（图4）。

图4. 抑制活性氧生成

【试验方法】

在样品40 μL 中加入DPPH溶液，在室温下反应1小时，然后使用多孔板检测仪进行了517 nm OD值检测（DPPH 终止浓度60 μM）。以各样品的溶解液或稀释溶液为空白样，设定样品添加区中的DPPH 基团添加组和非添加组之差为A，空白样添加区中的DPPH 基团添加组和非添加组之差为B，按下式计算得到了去除DPPH 基团活性。

去除DPPH 基团活性(%)={1-(A/B)}×100

【考察】

众所周知，人体内过剩的活性氧等自由基是引发皮肤斑及皱纹、动脉硬化、糖尿病、癌症及其他各种老化现象的罪魁祸首。自由基的产生和紫外线（日照）、吸烟、身体负担、药物化学物质及某些食品的摄取有关。清除这种自由基，是防止各种老化现象的重要的防患于未然的手段。

我们使用DPPH来评价消除自由基的活性。Gravinol KPA-CU在低浓度下就表现出了极强的自由基消除活性。葡萄籽多酚中的原花青素比维生素C、维生素E、儿茶素及没食子酸更具有强大的抗氧化能力，即使少量添加就可以消除自由基活性，强效抑制会导致皮肤的色素沉积及老化等一系列反应的初期刺激。

3.3. 抑制酪氨酸酶活性

使用蘑菇源酪氨酸酶，对抑制酪氨酸酶活性进行了评价（图5）。

图5. 抑制酪氨酸酶活性

【试验方法】

在样品20 μL中添加1/15 M Phosphate Bufer（pH6.8）100 μL和40 U/mL蘑菇源酪氨酸酶40 μL，混合后添加2.5 mM L-DOPA 50 μL，反应15 分钟后，使用多孔板检测仪进行了490nm 吸光度测定。以各样品的溶解液或稀释溶液为空白样，设定样品添加区中的L-DOPA添加组和非添加组的测定值之差为A，以空白样添加区中的L-DOPA添加组和非添加组的测定值之差为B，按下式计算得到了被抑制的酪氨酸酶活性。

抑制酪氨酸酶活性(%)={1-(A/B)}×100

3.4. 以左旋多巴为基质的抗酪氨酸酶活性

【试验方法】

将样品1mL、1/15 M磷酸缓冲液5mL和40U/mL酪氨酸酶溶液2mL混合在一起，静置5分钟以上，然后添加2.5mM左旋多巴溶液2.5mL，对10～20分钟后的着色进行了确认（图6）。

图6. 以左旋多巴为基质的抗酪氨酸酶活性

【考察】

皮肤的暗淡及雀斑等色素沉积的原因是黑色素在角化细胞的聚集，而酪氨酸酶是黑色素生成的关键所在。体内氨基酸的酪氨酸在酪氨酸酶的作用下经多巴、多巴醌最终作为黑色素排出、聚集。抑制了酪氨酸酶的活性便可以有效抑制黑色素的形成，因此具有抑制酪氨酸酶活性的曲酸、鞣花酸及熊果苷等物质被广泛用做美白剂使用。

Gravinol KPA-CU对酪氨酸酶活性的抑制和其浓度成正比。已有研究证实，原花青素的聚合度越高其抑制黑色素活性越强，那么由此可以认为含有大量高重合度的Gravinol KPA-CU对抑制酪氨酸酶活性有卓越的效果。

4. 产品概况

性状　          褐色～红褐色透明液体

pH　　          3.5 ～ 5.0

乙醇含量       25 ～ 35　vol％

固态成分浓度 10 ～ 15％

总黄烷醇含量 5％以上

建议配比　   0.01 ～ 1％

已按照药妆品标准（外原规）附页标准取得使用先例。可用作药妆品。