面部年轻化修复多肽疗法

衰老是内源性老化和外源性老化的综合结果。内源性老化受基因的调控，是老化的根本原因。外源性老化受环境因素影响，特别是日光、空气污染等,对老化起加速或延缓作用。而皮肤直接与外界环境接触，所以皮肤衰老受环境因素的影响较大。

 

皮肤衰老的生理改变

 

皮肤衰老明显的特征是皮肤松弛和皱纹、色素沉着、皮肤粗糙、皮肤变薄、角质屏障功能减弱。在细胞水平表现为表皮细胞更新减慢，角质形成细胞活力下降，真皮层中成纤维细胞数量减少，合成胶原蛋白和弹性蛋白的能力下降，Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的比值在衰老过程中逐渐倒置，胶原纤维逐渐变粗、出现异常交联；朗格汉斯细胞和黑素细胞数量明显下降、脂褐质明显增加，呈现出老年斑和其他色素沉着症状。皮脂腺与汗腺萎缩、分泌减少，出汗反应降低，皮肤表面的乳化物不足，角质层水合能力减弱，致使皮肤粗糙、干裂。在分子水平可表现为染色体端粒缩短，DNA甲基化水平降低，细胞因子及其受体生长或抑制的基因改变。

 

皮肤衰老学说

 

关于皮肤衰老机制有很多学说，比较典型的是自由基衰老学说、光老化学说、代谢失调衰老学说、非酶糖基化衰老学说、羰基毒化衰老学说、基质金属蛋白酶衰老学说、自由基-美拉德反应衰老学说、遗传学说、生物钟学说等。

 

延缓皮肤衰老的方法

 

根据这些学说，延缓皮肤衰老的途径可以归纳如下：

 

①清除过量自由基，减少自由基对机体的损伤、老化。

 

②预防日光照射。日光照射可引起皮肤红斑和色素沉着，加速皮肤胶原蛋白流失,使皮肤出现色斑和皱纹。

 

③抑制非酶糖基化反应和羰基毒化反应。

 

④抑制基质金属蛋白酶活性，减少胶原蛋白和弹性蛋白的降解和流失。

 

⑤强化皮肤防御及免疫系统，提高皮肤防护能力。衰老皮肤中朗格汉斯细胞减少，免疫力下降，易患感染性疾病导致皮肤衰老。

 

⑥保湿和修复皮肤的屏障功能。

 

⑦改善机体的代谢功能，促进细胞新陈代谢。

 

⑧补充胶原蛋白和弹性蛋白。随着年龄增长，胶原蛋白的降解加速，造成皮肤胶原蛋白流失，皮肤出现松弛、弹性下降、皱纹增加，因此补充皮肤胶原蛋白和弹性蛋白是延缓皮肤衰老的重要途径。

 

延缓衰老？还是“年轻化改变”？

 

年轻的皮肤还没有出现衰老的表现，抗衰的主要需求是预防。通过清除自由基、预防光损伤、抑制非酶糖基化反应和羰基毒化反应、抑制基质金属蛋白酶活性、加强保湿等手段以延缓衰老。

 

随着年龄增长，皮肤逐渐出现衰老的特征，在结构上的改变体现为表皮和真皮内细胞结构、功能以及细胞外基质组分的变化。此时，抗衰的需求除了预防，消费者更追求年轻化改变，通过促进细胞新陈代谢、补充流失的基质成分，使皮肤年轻化。

 

年轻化改变—一种多肽的发现

 

1961年，hayflick发现，原代细胞体外培养数十代以后就丧失了分裂能力，但细胞是存活的。他首次提出了细胞衰老也就是复制性衰老的概念，由此开创了细胞衰老研究领域。衰老细胞可以降低细胞复制及组织修复能力，分泌细胞因子招募炎性细胞，诱导细胞死亡。细胞出现衰老，就会导致组织的再生和更新能力下降。

 

维持皮肤有弹性、紧致的重要成分即为胶原蛋白组成的胶原纤维，胶原蛋白是皮肤的主要成分，皮肤中胶原蛋白占72％，真皮中80％是胶原蛋白。胶原蛋白流失是皮肤粗糙、痘疤、皱纹形成和老化的主要原因。随着年龄增长，胶原纤维含量明显下降，导致皮肤松弛及弹性下降。

 

上个世纪70年代，Pickart和Pilgeram发现一种存在于人血白蛋白中的物质，能让老年人肝脏组织变得与年轻肝脏组织几乎相同的合成蛋白质的能力，后续研究表明这种物质是一种小肽，简称为GHK，结构式如下：

 

GHK是ECM（胞外基质）蛋白，I型胶原蛋白中的氨基酸序列，可被伤口部位的蛋白酶释放，具有促进皮肤I型和Ⅲ型胶原蛋白生成的作用，可激活和调节皮肤修复过程。后续的研究证明GHK还具有促进表皮角质细胞增殖分化，修复表皮屏障，改善红血丝，抗衰等功效。

 

GHK的毒代动力学研究

 

据报道，在i.v.注射后，GHK迅速降解为L-组氨酰-L-赖氨酸，并在数分钟内从循环血液中迅速消除，数分钟后，血浆浓度-时间曲线表明在给药前血浆样品中未检测到两者。

 

研究报道，GHK在人血浆中是不稳定的，并且被氨肽酶迅速降解。

 

在酶测定中，GHK被从大鼠脑细胞溶质中纯化的氨基三肽酶水解。

 

年轻化疗法—专利修复多肽

 

WKPep®SRMPeptides维肤妍是维琪研发团队基于GHK开发的专利产品，通过调节肌肤自然生理机能和更新速度，促进表皮更新，修复纤维细胞，补充流失的胶原蛋白，激活肌肤再生修复力，全面改善衰老导致的皮肤外观改变，使皮肤年轻化。

 

经过功效测试，维肤妍具有以下功效：

 

①修复UVA损伤的人角质形成细胞（Hacat）（Invitrotest）

 

②修复UVA损伤的人成纤维细胞（HSF）（Invitrotest）

 

③促进I型胶原蛋白生成功效（Invitrotest）

 

④促进角质形成细胞迁移，与EGF对比（Invitrotest）

 

⑤促进人成纤维细胞迁移，与EGF对比的（Invitrotest）

 

⑥　皮肤年轻化：淡化皱纹、紧致收缩毛孔、改善粗糙度、修复屏障、修复敏感肌、改善红血丝（临床测试）

 

1、修复UVA损伤的人角质形成细胞（Hacat）功效测试（Invitrotest）

 

测试方法：将细胞分为对照组，模型组和样品组。对照组：正常培养液培养，不进行UVA辐照；模型组和样品组：在UVA照射后将培养基，加入不同浓度的维肤妍多肽进行孵育24小时。以UVA光源照射。

 

每组6个复孔，每组实验至少重复3次。采用One-wayANOVA来分析数据是否有显著性差异。

 

从细胞形态学观察可见，维肤妍多肽能改善UVA辐射后Hacat的受损程度，使细胞形态具有一定程度的恢复，细胞皱缩现象显著减轻，死亡细胞显著减少（如图C、D和E），并呈现剂量相关性。

 

 

图1基于UBA损伤的人角质形成细胞修复实验

 

2、提高人角质形成细胞（Hacat）活力的功效测试（Invitrotest）

 

测试方法：将Hacat细胞接种于细胞培养板中，培养24小时后进行紫外照射，再加入含不同浓度的维肤妍多肽培养基培养48小时后，利用酶标仪测定450nm处吸收度（OD值），计算细胞活力。

 

每组6个复孔，每组实验至少重复3次。所有数据用均数±标准差表示。统计软件SPSS20.0。采用One-wayANOVA来分析数据是否有显著性差异。以P<0.05为差异有统计意义。

 

图2基于UBA损伤的人角质形成细胞活力影响实验

 

Hacat细胞经不同浓度的维肤妍多肽处理后，细胞活力显著增加，并呈现剂量相关性。

 

3、促进人成纤维细胞迁移功效测试（Invitrotest）

 

细胞划痕迁移实验可评测产品或功效物对于伤口愈合的促进能力。

 

在基于人成纤维细胞的细胞迁移实验，实验结果显示，与溶剂对照SC组相比，样品维肤妍多肽在0.38μg/mL和1.5μg/mL两个给药浓度下，对人成纤维细胞细胞迁移均有一定的促进作用；样品维肤妍在6μg/mL给药浓度下，对人成纤维细胞细胞迁移有显著的促进作用，相对迁移率平均值达到47%。

 

图3基于人成纤维细胞的细胞迁移实验注：PC为阳性对照EGF，EGF厂家为PEPROTECH，比活力为1*107units/mg，样品浓度为10ng/mL。

 

4、促进I型胶原蛋白表达水平的功效测试（Invitrotest）

 

培养的人成纤维细胞经紫外照射后，加入含不同浓度的维肤妍多肽培养基培养，用酶联免疫吸附法（ELISA）测定Ⅰ型胶原蛋白表达水平，与对照组相比，经UVA照射后的模型组胶原蛋白表达水平显著下降，浓度降至49.79ng/mL（P<0.05）。与模型组相比，4.375ppm、8.75ppm和17.5ppm的维肤妍多肽均显著增加I型胶原蛋白水平（P<0.05），分别增长至66.97ng/mL、79.27ng/mL和88.37ng/mL。

 

图4促进I型胶原蛋白表达实验

 

每组6个复孔，每组实验至少重复3次。所有数据用均数±标准差表示。统计软件SPSS20.0。采用One-wayANOVA来分析数据是否有显著性差异。以P<0.05为差异有统计意义。

 

5、面部年轻化临床测试案例

 

                                                      志愿者01

      28天填充粗大毛孔缺失的皮肤组织，使皮肤细腻。

 

                                                     志愿者02

  28天有效紧致缩小毛孔（促进毛孔缺失的皮肤组织再生），改善粗糙度。

 

                                                     志愿者03

      使用28天，有效改善皱纹。

 

                                                    志愿者04

      使用28天，有效改善眼角皱纹。

 

测试仪器：法国C-Cube多功能皮肤成像分析系統

 

在经济飞速发展的今天，物质生活富足，人们对精神生活的要求也越来越高，"在看脸的时代”，消费者对化妆品的要求越来越高，由最初的安全、基础保养、预防，升级为高效、快速，因此引发“轻医美护肤品”的流行。

 

维肤妍多肽是基于皮肤特点开发的科学成分，安全有效，是“轻医美护肤品”优选的功效原料，可以添加于祛皱、抗衰、修复、紧缩毛孔、痘后修复、修复屏障，敏感肌修复等产品中。尤其在修复和面部年轻化应用中有极大的市场潜力，改善皮肤衰老的各种表现。

 

参考文献：

1. Hayflickl,MoorheadPS.These rial cultivation of humand diplaoid cell strains J. ExpellRes.1961,25(3):585-621.

2. Hye-Ryung Choi,a Youn-A Kang,a Sun-Jong Ryoo,Stem cell recovering effect of copper-free GHK in skin J. Pept. Sci. 2012; 18: 685–690.

3. Vadivel Arul a,Reena Kartha b, Rajadas Jayakumar a.A therapeutic approach for diabetic wound healing using biotinylated GHK incorporated collagen matrices. Life Sciences 80. (2007) 275–284.

4. Sachs, L. and Marks N. Biochim.Biophys.Acta. 1982;706:229.

5. Dalpozzo, A. Kanai K. Kereszturi G. and Calabrese G. J.Peptide Protein Res. 1993;41:561.

6. Sachs, L. and Marks N. A highly specific aminotripeptidase of rat brain cytosol. Substrate specificity and effects of inhibitors. Biochimica et Biophysica Acta. 1982;706:229-238.

 

 

维琪Winkey丁文锋博士陈言荣刘琦博士