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皮肤敏化（过敏）是皮肤暴露安全性评估中最难评测的一个端点。过敏是一个非常复杂的反应，通常涉及到人体血液和免疫系统。过敏反应难以预测，且可能与其他器官（如肺和消化系统）交叉反应。过敏反应可能是化妆品不良反应中唯一一个可以快速导致死亡的情形。护肤品是有可能导致过敏症的，尽管这种案例比较少见。西方人种护肤品过敏表现持续上升的事实更凸显了护肤品安全性评估的重要性。据日本国立保健科学研究院2014年的报道，在2009 年的一个案例中，两名病人一开始对洗脸皂中的水解小麦蛋白（HWP）发生过敏反应，随后在摄入小麦产品后发生严重的小麦依赖运动诱发过敏反应（WDEIA）。该研究院指出，从2009年截至2013年6月20日，从各类机构有超过1900名病人报告了此类过敏反应。重要的是，大部分病人使用了同样的洗脸皂（Cha no Shizuku，日本一洗脸皂品牌），该洗脸皂含酸水解小麦蛋白（Acid-HWP）。洗脸皂中的商业用酸水解蛋白（Glupearl 19S）是从面筋中提取的，平均分子质量为30~50kDa。
也许对小麦相关产品的过敏并不罕见，但是日本另一个报道将过敏源指向了一个我们认为并不有害的化合物：聚乙二醇同源化合物。土耳其的另一篇文章描述了婴儿对古龙香水严重过敏的现象，这名婴儿在其母亲将古龙香水涂于其面部后发生了过敏反应。这名本该健健康康两个月大的婴儿因为面部浮肿和呼吸短促被送进急救室。这名婴儿接受了一系列药物治疗，在症状消退后出院。
最后一个引人关注的过敏案例发生在西班牙。2010年，一位42岁的妇女在身体和面部使用一系列化妆品后，被发现对2-苯氧乙醇这种防腐剂过敏。在一次往手臂和腿上涂抹润肤霜之后，这位妇女立即发生荨麻疹并继而发生眩晕。一项在手前臂上的公开测试确认防腐剂苯氧乙醇会立刻导致阳性反应。
过敏反应分类
皮肤过敏反应可以大致分为即时过敏和延迟过敏。即时过敏反应与真皮中的肥大细胞的激活有关。这种激活可以通过抗体来缓解，通常若先前发生过一次皮肤接触或直接细胞暴露即可产生抗体。延迟过敏反应与淋巴系统中的T 细胞激活有关。这种激活也可以通过抗体来缓解。即时过敏反应也被称之为“1型”过敏反应或荨麻疹，延迟过敏反应也被称之为“4型”过敏反应。临床暴露试验，即人体重复激发斑贴试验（RIPT）被广泛应用于测试原料和配方的安全性。但该试验并不评估即时过敏反应，只涉及延迟过敏。除了一些学术机构的基础研究试验和临床皮肤点刺试验（用一根包含少量被测试过敏原的针刺入皮肤），目前尚无“1型”过敏反应的商业试验。化妆品的原料和配方通常也不经过这种测评。
在评估潜在致敏性时需要考虑一些前提条件。若要诱发此类反应，过敏原需要充分穿透角质层，并与皮肤中的载运蛋白发生反应。因此，只有充分暴露在过敏原中且个体具备免疫特异性时才会发生该过敏反应。
一种针对“4 型”过敏反应的评测叫做ARE-Nrf2荧光素酶测试法（使用角质细胞作为测试系统的方法），该方法基于Keap1-Nrf2-ARE通路。这些通路与氧化应激下的细胞保护反应，以及皮肤过敏的细胞过程有关。这种试验利用选择性质粒转染的HaCaT不衰人体角质形成细胞系来量化荧光素酶基因的诱导作用，以衡量ARE通路。Keap1 是一种传感蛋白，包含高活性可反应半胱氨酸，而不是赖氨酸。它作用于转录因子Nrf2，Nrf2对过敏的表达至关重要，且是过敏原诱导干扰素INF-γ形成的条件。因为致敏物质可能在皮肤蛋白反应中对赖氨酸或半胱氨酸发生反应，所以务请注意只对赖氨酸反应的潜在致敏物质不会诱发Keap1 通路，从而不在该试验中被鉴定。与赖氨酸通道相关的介质还需要进一步研究。
OECD针对ARE-Nrf2荧光素酶测试法的指导方针（编号442D）在2015年2月5日发布。该试验基于皮肤致敏物质可能对传感蛋白Keap1 发生反应，然后通过共价结合进而改变Keap1的结构使其与转录因子Nrf2分离。被分离的转录因子Nrf2能够在ARE依赖基因的激活中发生作用。该测试方法的一个优势是能够自弱到强划分潜在致敏物质。通过此种方法鉴定的致敏物如：肉桂醇和肉桂醛等弱致敏物；2-巯基苯并噻唑等中度致敏物；甲基二溴戊二腈等强致敏物。
另一个相对简单、快速和低成本的测定皮肤敏化作用的试验方法是直接肽反应试验法（DPRA）。该试验方法基于如下认识：为了激发大量免疫反应以产生抗体，致敏化合物或分子中的致敏核心成分必须与载体蛋白相结合。这个过程被称为半抗原化，致敏化学物被称为半抗原。DPRA 通过模仿致敏化学物在皮肤蛋白亲核域的共价结合，能够量化对于包含半胱氨酸和赖氨酸的模型合成多肽的化学反应。该试验需要通过包含合成肽的测试化合物的潜伏，合成肽含同一浓度的半胱氨酸或赖氨酸，一式三份持续24小时。分析端点在HPLC/UV分析平台上进行，通过溶剂对照来量化半胱氨酸和赖氨酸的损耗百分比。DPRA 由OECD在2015年2月5日发布，编号442C。
这两套离体分析试验法是现有研究中比较推荐的。这些研究的评估和验证还处于不同阶段。根据基因表达、细胞激活和细胞因子释放建议做进一步研究。但以上推荐研究中仍然缺少关于反应中肥大细胞作用及真皮中关键细胞群在缓解过敏尤其是“1型”即时过敏反应作用的评测。截止目前，没有任何一个单项试验可以预测所有可能的皮肤过敏反应，每一种试验都有其局限性，需要充分认识和考量。因此，在这些测评中需要设计并开展一系列试验。基于皮肤暴露的风险评定和其他与测试合成物相关的属性，研究的级别需要做对应的个性化调整。强烈建议建立电子定量构效关系（aSAR）以微调所选试验方法的结果。
参考文献：
Kobayashi T et al. Int J Dermatol. 54(8): (2015) e302-5
Yamasuji Y et al. Contact Dermatitis. 69(3): (2013) 183-5
Higashi Y et al. Allergol Immunopathol. 40(3): (2012) 198
Arikan-Ayyildiz Z et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 21(6):(2011) 494-5
Núñez Orjales R et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 20(4):(2010) 354-5
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-442d-in-vitroskin-sensi...
http://www.oecd.org/env/test-no-442c-in-chemico-skinsensitisation-978926...
Natsch A. Tox Sci. 113(2): (2010) 284-92
也许对小麦相关产品的过敏并不罕见，但是日本另一个报道将过敏源指向了一个我们认为并不有害的化合物：聚乙二醇同源化合物。土耳其的另一篇文章描述了婴儿对古龙香水严重过敏的现象，这名婴儿在其母亲将古龙香水涂于其面部后发生了过敏反应。这名本该健健康康两个月大的婴儿因为面部浮肿和呼吸短促被送进急救室。这名婴儿接受了一系列药物治疗，在症状消退后出院。
最后一个引人关注的过敏案例发生在西班牙。2010年，一位42岁的妇女在身体和面部使用一系列化妆品后，被发现对2-苯氧乙醇这种防腐剂过敏。在一次往手臂和腿上涂抹润肤霜之后，这位妇女立即发生荨麻疹并继而发生眩晕。一项在手前臂上的公开测试确认防腐剂苯氧乙醇会立刻导致阳性反应。
过敏反应分类
皮肤过敏反应可以大致分为即时过敏和延迟过敏。即时过敏反应与真皮中的肥大细胞的激活有关。这种激活可以通过抗体来缓解，通常若先前发生过一次皮肤接触或直接细胞暴露即可产生抗体。延迟过敏反应与淋巴系统中的T 细胞激活有关。这种激活也可以通过抗体来缓解。即时过敏反应也被称之为“1型”过敏反应或荨麻疹，延迟过敏反应也被称之为“4型”过敏反应。临床暴露试验，即人体重复激发斑贴试验（RIPT）被广泛应用于测试原料和配方的安全性。但该试验并不评估即时过敏反应，只涉及延迟过敏。除了一些学术机构的基础研究试验和临床皮肤点刺试验（用一根包含少量被测试过敏原的针刺入皮肤），目前尚无“1型”过敏反应的商业试验。化妆品的原料和配方通常也不经过这种测评。
在评估潜在致敏性时需要考虑一些前提条件。若要诱发此类反应，过敏原需要充分穿透角质层，并与皮肤中的载运蛋白发生反应。因此，只有充分暴露在过敏原中且个体具备免疫特异性时才会发生该过敏反应。
一种针对“4 型”过敏反应的评测叫做ARE-Nrf2荧光素酶测试法（使用角质细胞作为测试系统的方法），该方法基于Keap1-Nrf2-ARE通路。这些通路与氧化应激下的细胞保护反应，以及皮肤过敏的细胞过程有关。这种试验利用选择性质粒转染的HaCaT不衰人体角质形成细胞系来量化荧光素酶基因的诱导作用，以衡量ARE通路。Keap1 是一种传感蛋白，包含高活性可反应半胱氨酸，而不是赖氨酸。它作用于转录因子Nrf2，Nrf2对过敏的表达至关重要，且是过敏原诱导干扰素INF-γ形成的条件。因为致敏物质可能在皮肤蛋白反应中对赖氨酸或半胱氨酸发生反应，所以务请注意只对赖氨酸反应的潜在致敏物质不会诱发Keap1 通路，从而不在该试验中被鉴定。与赖氨酸通道相关的介质还需要进一步研究。
OECD针对ARE-Nrf2荧光素酶测试法的指导方针（编号442D）在2015年2月5日发布。该试验基于皮肤致敏物质可能对传感蛋白Keap1 发生反应，然后通过共价结合进而改变Keap1的结构使其与转录因子Nrf2分离。被分离的转录因子Nrf2能够在ARE依赖基因的激活中发生作用。该测试方法的一个优势是能够自弱到强划分潜在致敏物质。通过此种方法鉴定的致敏物如：肉桂醇和肉桂醛等弱致敏物；2-巯基苯并噻唑等中度致敏物；甲基二溴戊二腈等强致敏物。
另一个相对简单、快速和低成本的测定皮肤敏化作用的试验方法是直接肽反应试验法（DPRA）。该试验方法基于如下认识：为了激发大量免疫反应以产生抗体，致敏化合物或分子中的致敏核心成分必须与载体蛋白相结合。这个过程被称为半抗原化，致敏化学物被称为半抗原。DPRA 通过模仿致敏化学物在皮肤蛋白亲核域的共价结合，能够量化对于包含半胱氨酸和赖氨酸的模型合成多肽的化学反应。该试验需要通过包含合成肽的测试化合物的潜伏，合成肽含同一浓度的半胱氨酸或赖氨酸，一式三份持续24小时。分析端点在HPLC/UV分析平台上进行，通过溶剂对照来量化半胱氨酸和赖氨酸的损耗百分比。DPRA 由OECD在2015年2月5日发布，编号442C。
这两套离体分析试验法是现有研究中比较推荐的。这些研究的评估和验证还处于不同阶段。根据基因表达、细胞激活和细胞因子释放建议做进一步研究。但以上推荐研究中仍然缺少关于反应中肥大细胞作用及真皮中关键细胞群在缓解过敏尤其是“1型”即时过敏反应作用的评测。截止目前，没有任何一个单项试验可以预测所有可能的皮肤过敏反应，每一种试验都有其局限性，需要充分认识和考量。因此，在这些测评中需要设计并开展一系列试验。基于皮肤暴露的风险评定和其他与测试合成物相关的属性，研究的级别需要做对应的个性化调整。强烈建议建立电子定量构效关系（aSAR）以微调所选试验方法的结果。
参考文献：
Kobayashi T et al. Int J Dermatol. 54(8): (2015) e302-5
Yamasuji Y et al. Contact Dermatitis. 69(3): (2013) 183-5
Higashi Y et al. Allergol Immunopathol. 40(3): (2012) 198
Arikan-Ayyildiz Z et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 21(6):(2011) 494-5
Núñez Orjales R et al. J Investig Allergol Clin Immunol. 20(4):(2010) 354-5
http://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-442d-in-vitroskin-sensi...
http://www.oecd.org/env/test-no-442c-in-chemico-skinsensitisation-978926...
Natsch A. Tox Sci. 113(2): (2010) 284-92